Mots-clés: télomère, chromatine, épigénétique, Nicotiana tabacum, Ballantinia antipoda, modifications de l`histone, méthylation de l`ADN nous avons effectué le séquençage du bisulfite de deux régions de l`ITR — Ba493 et Ba576. Les DNAs des feuilles, des bourgeons floraux et des fleurs ont été convertis par le bisulfite de sodium et l`amplification PCR. Nous avons constaté que les 87, 96 et 82% des cytosines des répétitions télomériques situées dans la région de Ba493 étaient méthylés dans les feuilles, les bourgeons floraux et les fleurs, respectivement (figures 4B, C), tandis que 24% des cytosines des séquences télomériques de la région Ba576 étaient méthylées dans les feuilles et les bourgeons floraux et 56% en fleurs (figures 4B, C). Ainsi, les répétitions télomériques internes dans B. antipoda sont méthylées et le niveau de 5mC varie considérablement entre les régions Ba493 et Ba576 qui ont été soumises à l`analyse détaillée. Yoo, S. D., Cho, Y. H., et Sheen, J. (2007). Protoplastes d`Arabidopsis mésophylle: un système cellulaire polyvalent pour l`analyse transitoire de l`expression génique. NAT. protoc. 2, 1565 – 1572.

doi: 10.1038/nprot. 2007.199. . Du rapport entre les signaux d`hybridation utilisant DEGENER et les sondes de chargement (figures 3B, C), il est apparu que chez les espèces de Nicotiana, les 5mCs n`étaient pas répartis uniformément le long des télomères. Il y avait une différence dans le niveau de méthylation à la partie proximale du télomère par rapport à l`ensemble du télomère. Dans le N. tabacum, après 90 min de digestion Bal31, les télomères ont été dégradés à env. 2/3 de leur quantité initiale, tel que déterminé en comparant les intensités du signal de chargement dans l`analyse par tache de dot (figure 3B).

Dans cet échantillon, la densité relative des cytosines méthylées a diminué à ~ 80% (figure 3C), démontrant que le niveau des cytosines méthylées est légèrement inférieur dans la partie proximale du télomère par rapport à la valeur moyenne le long du télomère entier. Nos résultats appuient l`hypothèse selon laquelle les télomères authentiques présentent un double caractère épigénétique, avec H3K9me2 comme marque dominante tandis que les ITRs sont exclusivement hétérochromatiques. La présence de la H3K27me3 à des télomères authentiques dans le tabac [et son association avec les répétitions télomériques dans A. thaliana et le riz (Vaquero-Sedas et al., 2012)] représente une caractéristique intéressante. Sa signification fonctionnelle reste à élucider. Mandaková, T., Kovarik, A., Zozomova-Lihova, J., Shimizu-Inatsugi, R., Shimizu, K. K., Mummenhoff, K., et coll. (2013). Plus on est en colère: hybridation récente et polyploïdie en Cardamine. Cellule de la plante 25, doi: 10.1105/TPC. 113.114405 les cytosines méthylées dans les télomères végétaux ont été détectées par séquençage du fusil à pompe à génome entier (Cokus et al., 2008). Étant donné que les télomères sont le plus souvent méthylés à la troisième cytosine (interne) de la répétition de la CCCTAAA, nous avons conçu une sonde oligonucléotide dégénérée (appelée DEGENER) qui s`hybride aux séquences télomériques méthylées à la troisième cytosine en bisulfite-modifié L`ADN, tandis que les deux autres cytosines (externes) peuvent être méthylés ou non-méthylés (MAJEROVA et al., 2011b).

Pour évaluer la méthylation relative du télomère dans différents échantillons, nous avons normalisé le signal obtenu avec la sonde DEGENER au signal généré par une sonde de charge (pltel-C) qui s`hybride avec le brin télomérique riche en G. Modèle de châssis de bas niveau standard MTC pour une utilisation sur un quai de chargement surélevé. Modèle de châssis de haut niveau pour permettre au MTC d`être utilisé là où le quai de chargement est au niveau du sol. Option convoyeur de queue. Dimensions générales largeur sur la largeur du corps principal sur les entraînements. Des protoplastes de jeunes feuilles de N. tabacum et de N. tomentosiformis ont été isolés (Yoo et al., 2007). Les cellules ont été exposées à un mélange de 0,125 g de cellulase R10 (Serva); 0,025 g Macerozyme R10 (Serva) et 0,025 g de Pectolyase Y-23 (Duchefa Biochemicals) dans 10 ml de tampon de digestion (0,4 M de mannitol, 20 mM de KCl, 20 mM de pH 5,7, 10 mM de gch, 0,1% de BSA) pendant 4 h. les protoplastes frais ont été incorporés dans des blocs Fojtova et coll., 2002). L`ADN dans les blocs d`d`agarose a été digéré avec la nucléase Bal31 (1U par bloc) pour 15, 45 et 90 min dans un volume total de 300 μl. Un tiers de l`échantillon a été utilisé pour l`analyse du TRF pour vérifier l`étendue du raccourcissement du télomère par clivage Bal31.